Protein A亲和捕获-层析介质-纳微科技公司

抗l体的层析分离步骤基本都可以采用标准化的三步曲：步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余DNA，Endotoxin，Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，Protein A使用寿命短，连续流层析，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。

单分散无孔微球由于粒径均一，粒径大小精l确可控，因此把单分散无孔微球填充在层析柱中，其球与球之间形成的空隙大小及形状是可控的。这种空隙大小是由单分散聚合物微球大小决定的，微球越小，Protein A亲和捕获，间隙越小，因此层析柱的孔隙可以通过改变无孔微球粒径大小来进行精l确调节。纳微已开发出世l界领l先的微球制造技术，该技术可以对微球大小，均匀性进行前l所未有的控制。利用该技术优势纳微开发出病毒的单分散无孔聚合物层析介质，由于层析柱孔隙大小可控、耐压性好、柱床稳定、柱效高、分辨率高等优点，因此可以显著提高病毒的纯化效率，层析介质，大幅度提升病毒的纯度。这种方法非常适用实验室分离纯化病毒样品，但该方法使用的是实心球，因此比表面积低，病毒吸附载量低，不适合大规模分离纯化病毒或类病毒（疫l苗）。

层析介质材料种类及其对生物分离性能的影响

      目前市场上用于生物分离层析介质主要由两大类材料组成：类是以琼脂糖，葡聚糖为代表的天然高分子层析介质；第二类是以聚乙烯和聚丙l烯酸酯为代表的合成高分子层析介质。其中合成高分子微球可以精l确控制其粒径大小，粒径均匀性，并更多范围调节孔径大小，因此具有通透性高，分子传质速度快，有利于于生物大分子分离纯化。合成高分子层析介质的缺点是其疏水往往比软胶大，导致非特异性吸附大，容易使使生物分子失去活性。因此聚合物微球表面需要进行亲水化改性以降低其非特异性吸附才能满足层析分离的需求。